实验原理
CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖和细胞毒性测定试剂，可以用于评估细胞存活率、细胞增殖和细胞毒性。CCK-8试剂的原理是利用细胞内的酶将CCK-8试剂还原成发色产物，进而测定细胞数量。
实验步骤
以下是一般的CCK-8实验步骤：
步骤一：细胞处理
1. 将需要处理的细胞培养物分装到离心管中，离心以去除培养基。
2. 加入适量的PBS缓冲液洗涤细胞，离心去除PBS。
3. 加入适量的酶消化液（如胰酶）消化细胞，根据实验需要的细胞数量和处理方式选择消化时间。
4. 加入培养基，离心去除酶消化液。
5. 加入适量的培养基悬浮细胞，将细胞均匀分散。
步骤二：细胞孵育
1. 将处理好的细胞均匀分装到培养皿或孔板中。
2. 放入恒温培养箱中，设定适当的温度和CO2浓度，进行细胞孵育。
3. 根据实验需求确定孵育时间，一般为24-72小时。
步骤三：CCK-8试剂添加
1. 取出培养皿或孔板，将培养基倒掉。
2. 加入适量的CCK-8试剂溶液，使细胞充分接触试剂。
3. 轻轻摇晃培养皿或孔板，使CCK-8试剂均匀分布。
4. 将培养皿或孔板放回恒温培养箱中继续孵育。
步骤四：测定吸光度
1. 取出培养皿或孔板，将培养基倒掉。
2. 使用酶标仪或分光光度计测定CCK-8试剂的吸光度。
3. 记录吸光度数值，可根据需要进行数据分析和绘图。
步骤五：数据分析
1. 根据实验目的和需求，对测得的吸光度数据进行统计分析。
2. 可以计算细胞存活率、细胞增殖率等指标。
3. 进一步分析数据，得出实验结论。
总结
CCK-8实验是一种常用的细胞增殖和细胞毒性测定方法，通过测定细胞内酶的活性来评估细胞数量。实验步骤包括细胞处理、细胞孵育、CCK-8试剂添加、测定吸光度和数据分析。通过这一实验方法，可以快速、准确地评估细胞的存活率和增殖情况，为细胞生物学和药物研究提供重要的实验数据。